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兩種乙酰膽堿受體自身抗體檢測(cè)法比較:酶聯(lián)免疫法與放射免疫法

更新時(shí)間:2022-03-28點(diǎn)擊次數(shù):2242


煙堿型乙酰膽堿受體自身抗體(AChR Ab)是重癥肌無(wú)力(MG)的重要血清學(xué)標(biāo)志物,血清中AChR Ab的檢測(cè)對(duì)MG的診斷和治療有重要意義。本文比較了兩種測(cè)定AChR Ab的方法:放射免疫法(IPA)和酶聯(lián)免疫法(競(jìng)爭(zhēng)ELISA)。


在本研究中,在83例MG患者血清中,76例血清在ELISA法中呈陽(yáng)性 (陽(yáng)性率92%),72例在IPA法中呈陽(yáng)性 (陽(yáng)性率87%);在193例對(duì)照血清(疾病對(duì)照組和健康對(duì)照組)中,191/193例(99%)呈陰性,2例其他自身免疫性疾病的患者血清呈陽(yáng)性(在對(duì)照組中,ELISA法和IPA法的結(jié)果一致)。


RSR的AChR Ab競(jìng)爭(zhēng)ELISA法與現(xiàn)有金標(biāo)準(zhǔn)-放射免疫法特異性相同,靈敏度更高。此外,競(jìng)爭(zhēng)ELISA的精密度和操作特性使其適用于大批量和小批量樣品的常規(guī)測(cè)定。




入組樣本


1) MG疾病組:83例MG患者的血清(IPA檢測(cè)的AChR Ab濃度范圍在0.14到21 nmol/L 毒素結(jié)合量);


2)疾病對(duì)照組:93例其他自身免疫性疾病患者的血清(包括42例Graves病患者血清TSHR (TR Ab)自身抗體陽(yáng)性,11例橋本甲狀腺炎患者血清甲狀腺過(guò)氧化物酶自身抗體(TPO Ab)和/或甲狀腺球蛋白自身抗體(Tg Ab)陽(yáng)性,10例1型糖尿病(DM)患者血清谷氨酸脫羧酶自身抗體(GAD Ab)陽(yáng)性,10例阿狄森氏病(AD)患者血清類固醇21-羥化酶自身抗體(21-OH Ab)陽(yáng)性,10例類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RF)患者血清類風(fēng)濕因子(RFA)陽(yáng)性,10例系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者血清雙鏈DNA自身抗體(dsDNA Ab)陽(yáng)性)。


上述患者組的標(biāo)志物中,除類風(fēng)濕因子使用Behring試劑盒測(cè)定外,其他自身抗體均采用RSR公司的試劑盒檢測(cè)。


3)健康對(duì)照組:100例健康獻(xiàn)血者(HBD)的血清(美國(guó),Golden West)。



結(jié)果

01   ELISA法和IPA法對(duì)比


總體而言,在MG疾病組的檢測(cè)上,兩種檢測(cè)方法(ELISA法和IPA法)的結(jié)果吻合良好(r=0.85, n=83, p<0.001)(圖1)。


圖1 ELISA和放射免疫法(IPA)AChRAb檢測(cè)結(jié)果的相關(guān)性分析。y=0.31510.0364x;r=0.85;n=83。(A) 全尺寸。(B) 局部放大圖。水平和垂直虛線分別顯示ELISA和IPA臨界值。


02   靈敏度分析


83例MG患者血清中有80例 (96%) 在一種或兩種檢測(cè)中均呈陽(yáng)性。在83例MG患者血清中,76例血清在ELISA法中呈陽(yáng)性 (陽(yáng)性率92%),72例在IPA法中呈陽(yáng)性 (陽(yáng)性率87%)。與IPA法(n =72)相比,使用ELISA 法(n=76)檢測(cè)到更多的MG患者樣本呈AChRAb陽(yáng)性(表1)。


表1 在83例MG組中IPA和ELISA法的檢測(cè)結(jié)果

ELISA 法的正常參考區(qū)間:抑制率≤ 16%
IPA法的正常參考區(qū)間:毒素結(jié)合量< 0.5 nmol/L


差異樣本分析:


ELISA陽(yáng)性,IPA陰性:8例血清在ELISA法中呈陽(yáng)性(抑制率范圍為18 ~ 46%),而在IPA法中呈陰性(0.33 ~ 0.47 nmol/L毒素結(jié)合量)。


ELISA陰性,IPA陽(yáng)性:4例血清樣本在IPA法檢測(cè)中呈陽(yáng)性(0.56、0.61、1.44和2.91 nmol/L毒素結(jié)合量),在ELISA檢測(cè)中呈陰性(抑制率分別為14%、15%、8%和-1%)。在4個(gè)血清樣本中,其中兩例的雙方法學(xué)檢測(cè)結(jié)果都處于臨界值附近;另外兩例在IPA結(jié)果中,為AChR Ab弱陽(yáng)性值 (1.4 和2.9 nmol/L),這兩個(gè)樣本在IPA法檢測(cè)時(shí)被發(fā)現(xiàn)與胎兒型乙酰膽堿受體結(jié)合(數(shù)據(jù)未顯示),可能表明這兩個(gè)樣本中的AChR Ab結(jié)合到了我們ELISA實(shí)驗(yàn)中使用的3種單抗無(wú)法識(shí)別的位點(diǎn)上。


03   特異性分析


在其他疾病對(duì)照組和健康對(duì)照組的檢測(cè)中,ELISA法和IPA法的定性結(jié)果始終保持一致。


其他疾病對(duì)照組:在93例其他自身免疫性疾病患者(詳情見(jiàn)前面入組樣本部分)中,91/93例(特異性 98%患者測(cè)結(jié)果為AChRAb陰性。兩例患者檢測(cè)結(jié)果為AChRAb陽(yáng)性,分別為一例Graves病患者(ELISA法顯示28%抑制率,IPA法結(jié)果為1.3nmol/L 毒素結(jié)合量 )和一例系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者(ELISA法顯示44%抑制率,IPA結(jié)果為1.3nmol/L 毒素結(jié)合量)。


健康對(duì)照組:100例健康供血者中,100例(特異性 100%)均為抗體陰性。


03   批內(nèi)和批間精密度分析


競(jìng)爭(zhēng)法AChR Ab酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的批間變異系數(shù)(CV)如下:



競(jìng)爭(zhēng)法AChR Ab酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的批間和批內(nèi)變異系數(shù)(CV)結(jié)果顯示,低濃度樣本的批間和批內(nèi)差大于高濃度的樣本,是由于低濃度樣本的平均值偏小,CV的計(jì)算公式為標(biāo)準(zhǔn)差除以平均值。


原文:Hewer R ,   Matthews I ,   Shu C , et al. A sensitive non-isotopic assay for acetylcholine receptor autoantibodies[J]. Clinica Chimica Acta, 2006, 364(1-2):159-166.



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